檢測指標
|
指標
|
方法
|
標準
|
樣品
|
用量/g
|
過篩要求
|
|
酶活
|
土壤脲酶（S-UE）
|
分光光度法
|
林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
|
風干樣
|
0.5
|
60目
|
|
土壤堿性磷酸酶（S-AKP/ALP）
|
林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
|
|
土壤酸性磷酸酶（S-ACP）
|
林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
|
|
土壤中性磷酸酶（S-NP）
|
林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
|
|
土壤蔗糖酶（S-SC）
|
T/NAIA 010-2020 土壤蔗糖酶活性的測定 3,5-二硝基水楊酸比色法
|
|
土壤過氧化氫酶（S-CAT）
|
楊蘭芳,曾巧,李海波,閆靜靜.紫外分光光度法測定土壤過氧化氫酶活性
|
|
土壤脫氫酶（S-DHA）
|
林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
|
|
土壤過氧化物酶（S-POD）
|
關松蔭《土壤酶及其研究法》
|
|
土壤纖維素酶（S-CL）
|
林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
|
|
土壤多酚氧化酶（S-PPO）
|
林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
|
|
土壤硝酸還原酶（S-NR）
|
關松蔭《土壤酶及其研究法》
|
|
土壤酸性蛋白酶（S-ACPT）
|
李振高《土壤與環境微生物研究法》
|
|
土壤中性蛋白酶（S-NPT）
|
李振高《土壤與環境微生物研究法》
|
|
土壤堿性蛋白酶（S-AKPT）
|
李振高《土壤與環境微生物研究法》
|
|
土壤淀粉酶（S-AL）
|
林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
|
|
土壤羥胺還原酶（S-AL）
|
史云峰,武志杰,史奕,陳利軍,王殳屹.土壤羥胺還原酶活性測定方法的改進
|
|
土壤β-葡萄糖苷酶（S-β-GC）EC3.2.1.21
|
林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
|
|
亮氨酸氨基肽酶（S-LAP）EC3.4.11.1
|
段成偉,李希來,馬盼盼,徐文印,柴瑜,蘇樂樂,楊鑫光.人工修復措施對退化高寒草甸土壤養分及酶活性的影響
|
|
土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF）
|
關松蔭《土壤酶及其研究法》
|
|
N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）EC3.2.1.30
|
段成偉,李希來,馬盼盼,徐文印,柴瑜,蘇樂樂,楊鑫光.人工修復措施對退化高寒草甸土壤養分及酶活性的影響
|
|
β-木糖苷酶（S-BXYS）EC3.2.1.37
|
呂志忠. 碳氮調節對草地土壤生物學特性的影響及其土壤肥力質量綜合評價
|
|
土壤β-纖維素二糖苷酶（S-C1）/土壤纖維二糖水解酶（CBH）EC3.2.1.91
|
呂志忠. 碳氮調節對草地土壤生物學特性的影響及其土壤肥力質量綜合評價
|
|
漆酶（SL）
|
蘇寶玲,王月陽,白震,孫釗,何紅波,張旭東.ABTS底物檢測漆酶活力條件和算法比較——以長白山兩種林分土壤為例
|
|
土壤FDA水解酶
|
劉海芳,馬軍輝,金遼,陸琴,嚴蔚東,王校常.水稻土FDA水解酶活性的測定方法及應用
|
|
土壤亞硝酸還原酶（S-NiR）
|
關松蔭《土壤酶及其研究法》
|
|
土壤天門冬酰胺酶（S-ASNase）ES3.5.1.1
|
關松蔭《土壤酶及其研究法》
|
|
土壤谷氨酰胺酶（S-GLS）EC3.5.1.2
|
關松蔭《土壤酶及其研究法》
|
|
其他酶活
|
試劑盒或開發方法
|
|
微生物
|
細菌
|
平板計數法
|
林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
|
鮮樣，4℃運輸保存
|
20
|
10目
|
|
真菌
|
|
微生物
|
分光光度法檢測土壤酶活
分光光度法是檢測土壤酶活性的一種常見且有效的方法，它基于酶催化反應產物或輔因子在特定波長下的光吸收特性。這種方法快速、簡便，適用于多種土壤酶的活性測定，如脲酶、磷酸酶、過氧化氫酶等。
技術原理
分光光度法基于比爾定律（Beer's Law），即在一定條件下，溶液的吸光度與溶液中溶質的濃度成正比。通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析的方法。在土壤酶活性的測定中，分光光度法的基本原理是酶與底物混合經培養后產生某種帶顏色的生成物，可在某一吸收波長下產生特征性波峰，再用分光光度計測定設定的標準物及生成物的吸光值，由此確定酶活性的量。
實驗步驟
土壤樣本制備：將土壤樣本研磨成細粉，然后用適當的緩沖液或提取劑提取土壤酶。提取過程可能需要通過搖晃、超聲波處理或離心等方式進行。
反應體系構建：將土壤酶提取液與特定的底物、緩沖液及其他反應必需的成分混合，構成反應體系。
溫育：將反應體系置于適宜的溫度下溫育一段時間，讓酶催化反應充分進行。
終止反應：在預定的時間點，通過加入終止劑（如強酸或強堿）停止酶促反應，防止反應過度。
吸光度測定：使用分光光度計，在特定波長下測量反應前后溶液的吸光度變化。該波長通常對應于反應產物或底物的最大吸收峰。
數據處理：根據吸光度的變化計算酶活性。酶活性通常表示為單位時間內單位體積樣品中底物轉化為產物的量，單位如μmol/min/g干土。
注意事項
·標準曲線：為了準確測定酶活性，通常需要建立標準曲線，即已知濃度的產物或底物在特定波長下的吸光度與濃度的關系圖。
·空白對照：實驗中應設置空白對照，即不含酶的反應體系，用于扣除背景吸光度。
·溫度和pH：酶活性受溫度和pH的影響較大，實驗中應保持一致的條件。
·酶的專一性：某些酶可能對特定底物有專一性，選擇合適的底物和反應條件對于獲得準確的酶活性結果至關重要。
平板計數法檢測土壤中微生物
平板計數法是檢測土壤中微生物數量的一種基本且廣泛使用的方法。它基于微生物在固體培養基上形成可觀察的菌落這一原理，通過統計菌落數目來估算樣品中的微生物總數。
技術原理
平板計數法依賴于微生物在特定培養基上生長的能力。當土壤樣本中的微生物被稀釋并接種到含有營養物質的固體培養基上時，單個微生物細胞可以生長繁殖形成一個肉眼可見的菌落。通過統計培養皿上的菌落數量，可以估算出原始土壤樣本中微生物的大致數量。
實驗步驟
樣品準備
從土壤中采取有代表性的樣品，避免表層污染和人為污染。
稱取適量土壤（通常為0.1g到1g，具體量根據土壤類型和預期微生物密度調整），放入含有無菌生理鹽水或其他適宜稀釋液的錐形瓶中。
系列稀釋
對土壤懸浮液進行一系列梯度稀釋，通常稀釋到10^-1、10^-2、10^-3...等，以確保在平板上形成的菌落數落在可計數范圍內（通常為30到300個菌落）。
平板接種
取一定量（如0.1mL或0.01mL）的每個稀釋度的土壤稀釋液，使用涂抹棒或傾注法均勻涂布到固體培養基（如牛肉膏蛋白胨瓊脂、馬丁氏瓊脂等，根據目標微生物選擇合適的培養基）上。
培養
將接種后的平板倒置放入恒溫培養箱中，在適宜的溫度下培養（細菌通常為37°C，真菌為25°C到30°C），培養時間根據微生物種類而定，一般細菌培養18-24小時，真菌可能需要更長時間，如3-7天。
菌落計數
培養后，計數每個稀釋度平板上的菌落總數。選擇菌落數在30到300之間的稀釋度進行計數，以確保計數的準確性。
結果計算
根據稀釋倍數和計數結果，使用公式計算原始土壤樣品中的微生物數量（CFU/g或CFU/mL）。
注意事項
無菌操作：整個過程必須在無菌條件下進行，避免外界微生物的污染。
稀釋度選擇：合理選擇用于計數的稀釋度，過高或過低的菌落數都會影響計數的準確性。
重復性：每個稀釋度至少做三個平行平板，以提高結果的可靠性。
培養條件：確保培養溫度、時間和濕度條件適合目標微生物的生長，以利于菌落的形成。
樣品采集
點擊進入【學院】查看土壤樣品的采集制備與保存運輸。
樣本要求
在土壤檢測中，理化性質的差異，使檢測需要的樣本類型和樣本量存在不同。
基本類型
風干土：一般是利用自然條件風干的土壤。風干土多用于基本物理化學性質的檢測，如土壤中氨、磷、鉀元素。取樣后放在室內陰涼通風處自行干燥，切忌陽光直接暴曬，期間剔除雜質，避免污染。
鮮土：一般是指采集的新鮮樣本、或低溫保存的樣本。鮮土一般用于微生物相關的測定，如土壤中微生物量碳、微生物量氨、微生物數量、酶活等。新鮮樣品一般不宜貯存，如需要暫時貯存，可將新鮮樣品裝入塑料袋，扎緊袋口，放在冰箱冷藏室4℃儲存或進行速凍固定。
寄送要求
風干土：一般常溫寄送即可。
鮮土：建議用干冰寄送，如條件不滿足，可放置多個冰袋。
漢廣提供“一站式”檢測服務，減少科研工作者的工作量。您只需要提供樣本原樣，漢廣會嚴格按照國標或行標，進行樣本前處理，按照不同理化性質的檢測要求，對土壤樣本進行研磨，然后過濾不同規格的土壤。
取樣前，請與業務經理溝通您的檢測需求，確認樣品類型以及寄樣方式，以免影響檢測數據的真實性，造成時間及成本的損失！
服務流程
檢測儀器
